Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中随之扩展

从第一次再次出有现家兔自身特异性到再次出有现1同型肾病诊断症状的令人满意率在成人后期就有很好的所述，多个家兔自身特异性特征性的成人中的有70%在血液转换后10年内患上肾病，而随访15年的成人这一%-缩减到84%。相较之下，占诊断1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的发病组态还未获取充分的科学研究。

越发多的人开始常用再行系统来定义1同型肾病的令人满意：形态在再次出有现多种家兔自身特异性时进到第1期中，再次出有现血糖异常时进到第2期中，再次出有现症状时进到第3期中。一些多发家兔自身特异性特征性的形态，在1期和2期，令人满意较慢速，并持续发展为发病的1同型肾病。我们前所述了一组合成在首次检验到多种家兔自身特异性试样后至少10年无肾病的极慢速令人满意者，这组合成患儿总数少，但特征非常指明。随后，我们发掘出家兔自身蛋白质特异性CD8+T巨噬细胞中间体在令人满意较快的患儿中的基本不假定，但在最近发病和长期假定的肾病患儿中的很容易检验到。这可能指出，与令人满意患儿相较，这些患儿自身免疫中间体的调节大幅提高。

早期科学研究指出，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但肾病患儿假定一些机能缺陷，其中的有数对IL-2的中间体能力减小。此外，肾病患儿中的的现象CD4+T巨噬细胞可能对调节更是具抵抗性，表现为现象T巨噬细胞的消除减弱，纯净导致的Treg和活体导致的诱导Treg，以及蛋白质经历的CD4+T巨噬细胞中的IL-2中间体减弱。本科学研究的目的是所述了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群极较快令人满意者中的的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的纵向科学研究，在21岁以下肺炎的患儿亲属中的检查1同型肾病的危险因素。我们前所述了长期较快令人满意者的特征，他们始终保持多重家兔自身特异性特征性超过10年，但未再次出有现肾病的诊断症状，慢速性或非展开性自身免疫。随后，10名继续始终保持无肾病并想要提供大量血液试样的较快令人满意者纳入T和B巨噬细胞机能分析。在目前的科学研究中的，8名慢速令人满意者(SP组合成)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身特异性特征性。所有的自发性都位处1同型肾病令人满意的1期，尽管一些人随后无法控制了家兔自身特异性对某些蛋白质的特征性中间体，然而，一名患儿已经位处2期至少6年，但未再次出有现诊断症状，一名患儿被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集试验试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中的对该酪氨酸展开了单独评估。分开外周血单个中间体器巨噬细胞(PBMCs)，有别于多参数流式巨噬细胞奥义和T巨噬细胞消除次测试评估酪氨酸中的Treg的振幅、表同型和机能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重生)展开无监督聚类分析，评估Treg表同型。

结果：与健康酪氨酸相较，来自慢速令人满意体的梦境CD4+T巨噬细胞的监督聚类指出，启动时的梦境CD4+ Treg振幅缩减，与组合成胺诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表述缩减有关。一名HbA1c升高的患儿与令人满意较快者和也就是说的对照组合成相较，Treg谱有所不同。机能分析指出，与健康酪氨酸相较，来自较快令人满意体的Treg介导的CD4+现象T巨噬细胞消除相比受到破坏。表现为对现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的消除缩减。

三幅1 深入的表同型分析指出，CD4+Treg非典同型在慢速令人满意队列中的缩减。由FlowSOM生成的Treg四楼，聚集在来自所有酪氨酸的活着CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标识物表述鉴定出有10个元簇:梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)常用9个不同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个路由器代表一个一个大(100个一个大)，更是多的元一个大(10个元一个大)在路由器组合成周围打磨。每个路由器中的的饼三幅透露单个标识的表述级别。(b)每个元聚类的热三幅，以指出整体标识表述。(c, d)为HD组合成(c)和SP组合成(d)生成三幅，以及FlowSOM标识的每个元簇的沙质。(e-l)比较丰度为每个metacluster箱终点站三幅(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组合成:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T巨噬细胞(l)。深蓝色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 常用CITRUS的预测模同型推测，Treg振幅的缩减是令人满意较快的标志。评定门控(a - f)和橄榄分析(g-k)比较SP自发性和也就是说的HD自发性在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR表述展开分开，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组合成以及酪氨酸SP 606(深蓝色)中的CD25+ cd127的振幅综合三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱终点站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突出有的簇被标识为SP和HD队列之间的不同。(j)箱终点站三幅指出了在SP(蓝点)和HD(灰点)组合成中的，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比较丰度(%-)。(k)直方三幅指出每个簇的表同型(粉红色)和Treg标识比较表述与或多或少表述(深蓝色);上列，CPUTreg_3;示意图一行，CPUTreg_4。或多或少与所有其他簇中的标识的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与健康献血者相较，令人满意较快者梦境treg的GITR缩减。每个梦境CD4+T巨噬细胞元簇(梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个表述标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热三幅(sp606不有数在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表述相联，指出直方三幅(c)和综合三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有酪氨酸有数，p< 0.05(深蓝色)酪氨酸SP 606和也就是说的HD不有数在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR表述，从评定门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深蓝色)相联，指出直方三幅(e)和综合三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自较快令人满意的CD4+ treg巨噬细胞控制现象CD4+T巨噬细胞的能力减小。SP组合成用深蓝色的终点站和橘色透露，HD组合成用粉红色的终点站和橘色透露，深蓝色的终点站/橘色透露酪氨酸sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被标识为CFSE, Treg按捕捉到的%-氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠活着化巨噬细胞，培养3紧接著展开流式巨噬细胞奥义检验。(a-d)与CD4+接收者者比较应的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE消除总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除总和。常用特征性对照(启动时的号召巨噬细胞内含treg)计算消除总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 现象CD4+T巨噬细胞对较快令人满意的T巨噬细胞活着化的消除更是敏感。SP组合成用深蓝色的终点站和橘色透露，HD组合成用粉红色的终点站和橘色透露，深蓝色的终点站/橘色透露酪氨酸sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标识，treg按捕捉到的%-氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠活着化巨噬细胞，培养3紧接著展开流式巨噬细胞奥义(CD25反染)和巨噬细胞因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者协力培养。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE消除花红(b)。(c,d) CD25消除花红(c)和CD134消除花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在五小中的的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们推断的论点是，来自较快令人满意子的活着化梦境CD4+Treg在GITR表述中的获取了适配和丰富，强调了全面科学研究Treg在1同型肾病可能性形态中的的异质性的必要性。

文中出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28